L'histologie est une étape cruciale de toute étude préclinique lors de la mise sur le marché d'un dispositif médical et ne doit pas être négligée lors de l'examen des délais de développement. L'histologie tissulaire fournit aux régulateurs de la Food and Drug Administration (FDA) des preuves physiques, jusqu'au niveau cellulaire, sur la façon dont un dispositif interagit avec les tissus. Si les résultats de l'histologie ne montrent aucun signe d'événements indésirables (EI) en relation avec un dispositif spécifique, le dossier du fabricant est renforcé auprès des régulateurs et indique que ledit dispositif est prêt pour les essais cliniques sur l'homme.
Dans le blog suivant, NAMSA met en évidence les techniques histologiques utilisées pour préparer les tissus d'étude précliniques en vue d'analyses histologiques par fixation, inclusion et sectionnement des tissus.
I. PRÉPARATION HISTOLOGIQUE : FIXATION ET INCORPORATION DES TISSUS
A. Blocs de tissus inclus dans la paraffine
Après la fixation du tissu, le plus souvent avec du formol tamponné neutre à 10 % (NBF), le tissu préservé est déshydraté, clarifié et inclus dans de la paraffine pour créer ce qu'on appelle du tissu « fixé au formol et inclus dans de la paraffine » (FFPE).
Les blocs de tissus FFPE sont la méthode de conservation la plus courante en histologie médicale, généralement utilisée pour l'observation en microscopie optique et pour les études histologiques uniquement sur tissus où un dispositif de test peut être facilement retiré sans endommager les tissus.
Cependant, dans certains cas, des échantillons du dispositif inclus dans la paraffine peuvent être créés à condition qu'ils soient constitués de matériaux plus souples, tels que le silicone, qui peuvent être facilement coupés en fines lamelles avec une lame de microtome lors de la coupe.
Il est important de noter que le timing est un facteur critique dans le processus de prélèvement de tissus FFPE. Le tissu doit être placé dans un fixateur peu de temps après l'excision ; la fixation complète prend au moins 48 heures selon la taille et la densité du tissu. Entre le moment où le tissu est obtenu et le rapport de pathologie préliminaire, une étude à la paraffine prend généralement 8 à 10 semaines.
B. Enrobage de Spurr (enrobage plastique)
L'inclusion de plastique est un procédé plus laborieux qui nécessite un équipement spécial. Il est particulièrement adapté à la microscopie électronique et aux études histologiques où il est impossible de retirer un dispositif de test sans endommager les tissus.
À ce stade, l’inclusion plastique présente un avantage car elle permet d’évaluer directement l’interaction entre le tissu et le dispositif.
C. Incorporation OCT
L'OCT signifie Optimal Cutting Temperature compound (composé à température de coupe optimale). Il s'agit d'un procédé d'enrobage rapide pour les tissus congelés et il est utilisé pour répondre à certaines exigences telles qu'une analyse enzymatique. Cette méthode d'enrobage ne nécessite pas de tissu fixé et consiste à congeler instantanément le tissu à l'aide d'azote liquide. L'OCT est une technique d'enrobage moins courante, mais elle constitue une option lorsque l'enrobage à la paraffine et à la résine époxy peut détruire certains éléments tissulaires.
II. LE PROCESSUS DE COUPE DE TISSUS
Après la fixation et l'inclusion des échantillons, l'étape suivante consiste à découper les blocs de tissus en fines sections afin qu'ils soient visibles au microscope. L'objectif est de les découper en tranches d'environ une couche cellulaire d'épaisseur afin que la lumière puisse passer à travers et que les effets d'un appareil sur les cellules tissulaires soient visibles au microscope.
Voici un aperçu des techniques de coupe histologique de NAMSA :
- Les microtomes de NAMSA sont capables de découper des blocs de paraffine ou de plastique en rubans ultra-fins, plus étroits que la largeur d'un cheveu humain, généralement d'une épaisseur comprise entre 4 et 6 microns.
- La technique de rectification EXAKT est un service unique qui NAMSA Il utilise une scie à ruban avec une lame diamantée et une meuleuse avec différents grains de papier abrasif et de polissage. Il permet de fabriquer des lames à partir du dispositif en alliage dur intégré au plastique et du tissu d'une épaisseur d'environ 70 microns.
- La cryosection est utilisée pour les coupes de tissus congelés ; il s'agit d'un microtome utilisé dans une chambre froide. Les tissus destinés à l'évaluation enzymatique sont coupés sur une épaisseur comprise entre 8 et 12 microns.
L'histologie est un processus laborieux et précis qui ne peut être bâclé. Cependant, le résultat vaudra la peine pour cette partie de votre projet de développement car il présentera les preuves physiques requises concernant la sécurité et l'efficacité du produit à la FDA américaine et aux autres organismes de réglementation.
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Lorsqu’il s’agit de mener des études de recherche avec succès, l’expérience compte. NAMSA NAMSA a accumulé la plus grande étendue et la plus grande profondeur d'expertise et de connaissances thérapeutiques, plus que tout autre partenaire de développement préclinique de l'industrie. Les services de recherche préclinique et d'histologie de NAMSA offrent un soutien pour tous les types de modèles, traitements et exigences d'implants, y compris les domaines suivants : cardiovasculaire, dentaire, cutané, électrophysiologique, gastro-intestinal, neuromodulation, orthopédie, pulmonaire, urogénital, cicatrisation des plaies et plusieurs autres.
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